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A375/DDP细胞株材料和试剂讲解

点击次数:256 发布时间:2018-06-25
A375/DDP细胞株在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。 传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞株直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
A375/DDP细胞株材料和试剂
1.细胞:贴壁细胞株
2.试剂:0.25%胰酶、1640培养基(含10%小牛血清)
3.仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等
A375/DDP细胞株初代组织块培养法
1.剪切:把组织小块置于小烧杯或青霉素小瓶中,用Hanks液漂洗二三次以去掉表面血污,吸静Hanks液,用眼科剪反复剪切1mm3块为止。
2.摆布:用弯头吸管吸取若干小块,置于培养瓶中,用吸管弯头把组织小块摆布在培养瓶底部,小块相互距离以0.5cm为宜,每一25ml培养瓶底可摆布20——30块。
3.轻轻翻转培养瓶,另瓶底向上,注意翻瓶时勿另组织小块流动,塞好瓶塞,置36.5℃温箱培养2小时左右(勿超过4小时),使小块微干涸。
4.培养:从微箱中取出培养瓶,开塞,46度斜持培养瓶,箱瓶底脚部轻轻注入培养液少许,然后缓缓再把培养瓶翻转过来,让培养液慢慢覆盖附于瓶地上的组织小块。置温箱中静止培养。待细胞从组织块游出数量增多后。再补加培养液。
A375/DDP细胞株操作步骤:
1.吸除培养瓶内旧培养液。
2.向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少许,以能覆满瓶底为限。
3.置温箱中2——5分钟,当发现细胞质回缩,细胞间隙增大后,立即终止消化。
4.吸除消化液,向瓶内注入Hanks液数毫升,轻轻转动培养瓶,把残余消化液冲掉。注意加Hanks液冲洗细胞时,动作要轻,以免把已松动的细胞冲掉流失,如用胰蛋白酶液单独消化,吸除胰蛋白酶液后,可不用Hanks液冲洗,直接加入培养液。
5.用吸管吸取营养液轻轻反复吹打瓶壁细胞,使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。
6.计数板计数后,把细胞悬液分成等份分装入数个培养瓶中,置温箱中培养。
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